Xi:
方法一、重组TNFα的工艺过程
细菌发酵 将工程菌接种于LB培养基，37℃震荡培养至A600nm=1，转至M9培养基，于42℃诱导4h。离心，收集菌体。用pH为8的磷酸盐缓冲液(PB，10mmol/L)悬浮菌体，并用超声破碎菌体，离心收集上清液，对PB透析，得TNFα粗品。
工程菌[培养、发酵]→[37℃、42℃]发酵菌体[10mmol/L PB]→[pH8]TNFα粗品
DEAE-Sepharose FF 离子交换柱层析 离子交换柱用PB平衡，加TNFα粗品，用PB洗柱，再加75 mmol/L NaCl洗脱，收集各峰，测TNFα活性。
TNFα粗品[DEAE-Sepharose FF离子柱]→[75 mmol/L NaCl]TNFα活性组分I
Q-Sepharose FF离子交换柱层析 离子交换柱用pH 8、20 mmol/LTris-HCl缓冲液平衡，然后加TNFα活性组分I，用80 mmol/L NaCl洗脱，收集各峰，测TNFα活性，得TNFα活性组分II。
TNFα活性组分I[Q-Sepharose FF离子柱]→[80 mmol/L NaCl]TNFα活性组分II
CM-Sepharose FF离子交换柱层析 离子交换柱用pH为6的10mmol/L PB平衡，加TNFα活性组分II，再依次用该PB液、PB液加200mmol/L NaCl及PB液加600 mmol/L NaCl分步洗脱，收集各洗脱液，测TNFα活性，即得TNFα纯品(在4℃时，通过三次常压离子交换，电泳表明：PB液加600 mmol/L NaCl的洗脱峰为TNFα单一条带，可得TNFα纯品)。
TNFα活性组分II[CM-Sepharose FF离子柱]→[PB、200及600mmol/L NaCl]TNFα纯品
方法二、对合成的TNFα突变改造
突变改造 用多位点突变引物和PCR方法对合成的TNFα基因突变改造，使其第二位精氨酸密码子CGT变为赖氨酸密码子AAA，即得突变基因TNF-K2。
TNFα基因[多位点突变引物、PCR方法]→TNF-K2
转化、重组 将TNF-K2插入载体pSB-92的PL启动子下游，转化E．coliJM103，经酶切鉴定筛选转化子，得重组质粒pSB-TNF-K2。TNF-K2[pSB-92]→pSB-TNF-K2
培养、诱导 将pSB-TNF-K2于30℃培养至对数生长期，于42℃诱导4h，即得突变体[Lys2]TNFα，其分子量为17kD，比活性为6.8×107U/mg 蛋白，是一种可溶性蛋白质。
pSB-TNF-K2[30℃, 42℃, 4h]→[Lys2]TNFα.
用作银量法的吸附指示剂和生物染色剂。主要用于抗肿瘤和抗病毒综合征的治疗。
存放在密封容器内，并放在阴凉，干燥处。储存的地方必须远离氧化剂。
远离氧化物。
1. 性状：红色粉末。
2. 密度（g/mL,25/4℃）：未确定
3. 相对蒸汽密度（g/mL,空气=1）：未确定
4. 熔点（ºC）：＞300
5. 沸点（ºC,常压）：未确定
6. 沸点（ºC,5.2kPa）：未确定
7. 折射率：未确定
8. 闪点（ºC）：未确定
9. 比旋光度（º）：未确定
10. 自燃点或引燃温度（ºC）：未确定
11. 蒸气压（kPa,25ºC）：未确定
12. 饱和蒸气压（kPa,60ºC）：未确定
13. 燃烧热（KJ/mol）：未确定
14. 临界温度（ºC）：未确定
15. 临界压力（KPa）：未确定
16. 油水（辛醇/水）分配系数的对数值：未确定
17. 爆炸上限（%,V/V）：未确定
18. 爆炸下限（%,V/V）：未确定
19. 溶解性：溶于水。
1、 疏水参数计算参考值（XlogP）：8.5
2、 氢键供体数量：2
3、 氢键受体数量：5
4、 可旋转化学键数量：0
5、 拓扑分子极性表面积（TPSA）：76
6、 重原子数量：33
7、 表面电荷：0
8、 复杂度：780
9、 同位素原子数量：0
10、 确定原子立构中心数量：0
11、 不确定原子立构中心数量：0
12、 确定化学键立构中心数量：0
13、 不确定化学键立构中心数量：0
14、 共价键单元数量：1
