Cas 199293-83-9 吖啶酯（NSP-SA-NHS）和相关化合物已被证明是非常有优势的化学发光标记物，稳定性，活性和敏感性超过了那些放射性同位素。吖啶酯能与任何含有氨基的蛋白发生反应（见图1）。在碱性条件下，NHS将会离去，吖啶酯将会以一个稳定的酰胺键与蛋白质结合形成吖啶化合物。反应完成后，多余的吖啶盐通过脱盐柱除去。在存在碱性过氧化氢，吖啶标记的蛋白不需要酶催化可自行发光。加入激发试剂后，体系立即释放光子，可以用430nm标准光度计检测。这个发光过程是十分短暂（整个过程的发生小于2秒），触发方案必须增加内部光度计和光子探测器。蛋白质，多肽，抗体，核酸都可以用吖啶标记。标记化合物在碱性过氧化氢的激发下快速发光，通过收集光子可以检测到标记化合物。
主要用途： 化学发光及免疫分析、受体分析、核酸及多肽检测等研究。
发光原理
在碱性H2O2溶液中,吖啶酯受到过氧化氢离子的进攻,生成一个有张力的不稳定的二氧乙烷,进一步分解成CO2和电子激发态的吖啶酮,当吖啶酮回到基态时发出最大吸收波长430nm的光子.
产物特点
1 发光反应在形成电子激发态中间体之前,联结于吖啶环上的不发光的取代部分与发光部分分离,因而其发光效率基本不受取代基结构的影响.
2 不需催化剂,也不需要增强剂,在有H2O2的稀碱性溶液中即可发光.
3 其发光类型为闪光型,加入激发液后,0.4s左右发光强度达最大,半衰期0.9s左右.
产品优点
1 背景发光低,信噪比高
2 发光反应,干扰因素少
3 光子释放快速集中,发光效率高,发光强度大
4 易与蛋白偶联,偶联后光子产率不减少,增加灵敏度,2-8℃可以保存数月之久
5 固相分离剂为极细的磁粉,除增大包被面积,加快反应外,亦可同时清洗.
产品稳定性
1 在酸性溶液中(pH<4.8)都很稳定,与蛋白质偶联物在室温下保存4周,其光量子产率不降低,冻干品在-20℃下,可以保存一年以上.
2 当pH>4.8,尤其在碱性溶液中,吖啶化合物由于部分发生水解降低了其稳定性,水解过程为不发光的暗反应过程;水解程度随pH增大而增大,随温度的升高而增大.
3 吖啶酰胺稳定性较高于吖啶酯结构,抗水解能力较强.
4 吖啶环或酚环或苯磺酰环上连有甲基等给电基团,由于空间位阻大,热稳定性增加;连有吸电子基团,有利于亲核取代反应而使其稳定性下降.
5 部分用户反馈蛋白标记后,过段时间发光量有所下降,建议:
偶联后保存用的缓冲液尽量用弱酸性的缓冲液,鼓氮气除去其中的氧气.密封避光低温保存.有条件的可以制成冻干样再保存
