1,4 - 哌嗪二乙磺酸(5625-37-6)

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基本信息

  • 1,4 - 哌嗪二乙磺酸 1,4 - 哌嗪二乙磺酸 PIPES
  • 1,4-哌嗪二乙磺酸
  • 5625-37-6
  • 1,4-哌嗪二乙磺酸(PIPES);哌嗪-1,4-双(2-乙基磺酸);哌嗪-1,4-二乙磺酸;1,4-哌嗪二乙磺酸;哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸),哌嗪-1,4-二乙磺酸;哌嗪-N,N'-双(2-乙磺酸);1,4-哌
  • C8H18N2O6S2
  • 302.36
  • 1,4-Piperazinediethanesulfonicacid
  • 227-057-6
  • 1.505 g/cm3
  • 1,4-Piperazinebis(ethanesulfonicacid); 1,4-Piperazinebis(ethansulfonic acid); NSC 157117; PIPES;Piperazine-1,4-bis(2-ethanesulfonic acid); Piperazine-N,N'-bis(2-ethanesulfonicacid)
  • >300°C(lit.)

详细信息

哌嗪二乙磺酸PIPES有多种缓冲液体系,其中缓冲溶液Transformation Buffer(也叫TB溶液)可用于制备高效率感受态的细胞。

感受态是指细胞(或细菌)能够从周围环境中摄取,并且不易被细胞内的分解时所处的一种特殊生理状态。有些细菌是自然感受态,如,有些是人工感受态,如大肠杆菌。经过特殊方法处理受体细胞,可改变细胞膜通透性,使其成为容许有外源DNA的载体分子通过的。

感受态TB溶液原料——PIPES粉末

Transformation Buffer制备:

配制哌嗪二乙磺酸PIPES 3.0g 10mM、CaCl2·2H2O 2.2g 15mM、KCl 18.6g 250mM,加水 950ml,用5N KOH 调PH至6.7-6.8*低PH不溶,再加终浓度为55mM的MnCl2·4H2O 10.9g定溶到1升,过滤灭菌,4度保存。

感受态细菌细胞的转化采用氯化钙的方法。液氮或低温冰箱中取出的大肠杆菌,在LB平板上划线,37度过夜至长出单菌落。挑直径1-3mm 的菌落接种到250ml/3L锥形瓶或80ml/1L 锥形瓶的SOB培养基。在18度150-250RPM 培养19-50h。当OD600约0.4-0.8时停止培养,放在4度冰水中冷却10min,300RPM离心15min,回收菌体去掉上清后,用1/3体积的冰冷TB溶液悬浮,在冷10min再次离心回收菌体用1/12.5体积的TB悬浮,添加最终浓度为7%的DMSO,再冷却10分钟0.1-1ml 分装,直接在液氮或-80度保存。

悬浮大肠杆菌的TB溶液中,主要其作用成分包括缓冲液PIPES和使细胞转化成感受态的氯化钙。需要注意的是,该方法适用不含有质粒的,而不适合大质粒,冻存后转化效率有降低的可能。另外,不同细菌菌株的最适宜OD600也是是不同的,需要根据不同试验调整。

用TB制备感受态细胞的方法还有很多,不同的方法效率高低可能有差异,适用的菌种或细胞类型也可能不同。德晟生产的PIPES为粉末试剂,可根据不同的需求自行配制感受态TB溶液。

公司信息

湖北新德晟化工科技有限公司

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