产品名称 : 革兰氏染色液
规格:4×100mL | 4×250mL | 4×500mL
有效期:12个月
存储 常温运输,阴凉避光保存,有效期12个月
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌细胞壁较厚,肽聚糖网层次较多且交联致密,乙醇脱色时,肽聚糖脱水使孔径缩小,故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上,呈紫色。革兰氏阴性菌细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,脱色后类脂外膜迅速溶解,缝隙加大,结晶紫与碘复合物溶出,因此乙醇脱色后再经番红复染,呈红色。
操作步骤:
1、标本处理
(1).有菌部位的标本,如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直接涂片。
(2).无菌部位的标本,如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等,应取适量标本(最高可达5-7ml),经3000rpm 离心10min.,取沉渣涂片染色。
2、涂片制作
菌液涂片时,用接种环沾取菌液点在载玻片上,标本可直接在玻片上涂布;菌落涂片时,先取生理盐水一滴,置玻片上,用接种针挑取菌落在盐水中涂布。制作的涂片应自然干燥,并经火焰固定,固定的温度不宜过高,以玻片背面接触手背不烫为准,否则可能使细菌形态改变。将固定后的涂片进行染色。
3、染色
一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是:
(1)加上结晶紫后,染色 1 分钟,水洗。
(2)加上碘液后染色 1 分钟,水洗。
(3)加上 95%酒精,摇动玻片,根据涂片厚度,脱色约 20-60 秒,水洗,吸去水分。
(4)加上蕃红后,染色 1 分钟,水洗。
(5)吸干或在空气中凉干后,油镜镜检。
注意:革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度,如脱色过度,则阳性菌可被误染为阴性菌;而脱色不够时,阴性菌可被误染为阳性菌。此外,菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间过长,或已死亡及部分菌体自行溶解,
都常呈阴性反应。
4、结果观察:革兰氏阴性菌呈红色,革兰氏阳性菌呈紫色。以均匀分散开的细菌的革兰氏染色反应为准,过于密集的细菌,常常呈现假阳性。